Devido a sua elevada concentração de carboidratos e sua estrutura química rica em nutrientes, o Agar é um excelente meio de cultura para o crescimento de vários tipos de fungos, leveduriformes e filamentosos. Sua consistência gelatinosa permite uma manipulação fácil e segura dentro do ambiente laboratorial.
O meio de cultura ágar sangue é comumente usado em laboratórios de análises clínicas, como a produção primária para a separação de Streptococcus spp e Staphylococcus spp. O sangue humano pode ser utilizado quando há a necessidade de separar o bacilo da tuberculose em saliva.
Preparação e distribuição
O Ágar Sangue de Carneiro é um meio de cultivo para a grande maioria das bactérias gram positivas e gram negativas, como fungos (bolores e leveduras), a partir de uma base rica e suplementada que oferece ótimas condições para o desenvolvimento de microorganismos.
Esfrie-as cuidadosamente antes da coleta. Sempre abra os recipientes próximos à chama do bico de Bunsen. Evite que as tampas dos tubos e placas fiquem sob a bancada durante o cultivo. Não perfure ou rasgue o ágar, pois acarreta o acúmulo de bactérias e altera as condições de crescimento bacteriano.
quarta-feira, 1 de maio de 2013
1. Cultivando bactérias
Exame cultura bacteriana em diversos materiais biológicos O primeiro passo é a coleta dos materiais biológicos que estejam contaminados com as bactérias, por isso, o médico pode solicitar a coleta de fezes, sangue, urina, saliva, catarro ou até mesmo células de um órgão que esteja contaminado.
Cultura pura ou axénica Para obter uma cultura pura podem ser usadas as técnicas de: riscado em meio sólido. espalhamento em meio sólido. incorporação.
Para efetuar a contagem total de bactérias numa determinada suspensão de amostra faz-se diluições decimais seriadas do espécime e inocula-se, usualmente, em Profundidade ou Incoporação (Pour-Plate) ou pelo método de espalhamento em placa com alça de Drigalsky, em meios de cultura apropriados.
Quando todas as placas apresentarem mais de 250 colônias na maior diluição, multiplicar o resultado encontrado em cada placa pelas respectivas diluições e calcular a média aritmética. Expressar o resultado como estimado. Exemplo: Dil: 10-4 = 380 colônias 380 x 10.
Principais meios de cultura utilizados e suas aplicações
- Os tubos não precisam estar esterilizados caso o meio seja distribuído antes de autoclavar. Após a autoclavação, as vidrarias e os outros materiais devem ser estéreis para a distribuição do meio; - Os meios de placa devem ser embalados em filme de plástico PVC a fim de evitar o ressecamento.
O ágar citrato é utilizado na identificação de bactérias, principalmente as enterobactérias, que o utilizam como fonte de carbono. Quando as bactérias metabolizam o citrato alcalinizam o meio. O pH básico faz o meio, que antes apresentava-se verde, ficar azul, devido ao indicador azul de bromotimol.
Alguns microrganismos utilizam o azoto atmosférico (N2), outros contam com compostos inorgânicos como a amónia e os sais de nitrato, enquanto outros necessitam de compostos orgânicos que contêm azoto como os aminoácidos.
Primeiro é preparado o ágar (muitos deles já contém os nutrientes necessários para a cultura) que em seguida é despejado na placa de Petri, formando uma camada no fundo. Depois que a solução endurece, o microrganismo pode ser inoculado, geralmente através de uma alça de inoculação.
Chamamos de colônia o conjunto de bactérias que se forma por multiplicação, a partir de uma bactéria "mãe".
Organismos anaeróbicos aerotolerantes são bactérias que respiram anaerobicamente, mas que podem sobreviver na presença de oxigênio. Bactérias anaeróbicas facultativas podem realizar tanto fermentação quanto respiração.