Marcadores moleculares baseados no modo de ação gênica Marcadores moleculares dominantes: possibilitam a identificação da presença ou ausência de um determinado alelo. Marcadores moleculares Codominantes: possibilitam diferenciar indivíduos homozigotos e heterozigotos, diferentemente dos marcadores dominantes.
Biomarcadores ou marcadores biológicos são entidades que podem ser medidas experimentalmente e indicam a ocorrência de uma determinada função normal ou patológica de um organismo ou uma resposta a um agente farmacológico.
Os marcadores morfológicos são a classe de marcadores tradicionalmente utilizada na caracterização de cultivares e tem sua importância reconhecida. ... Marcadores bioquímicos de proteínas e enzimas também são produtos da expressão de genes, podendo ser utilizados como descritores para a caracterização de cultivares.
O uso de marcadores moleculares permite que a seleção e novos cruzamentos sejam realizados em uma mesma geração, o que aumenta consideravelmente a eficiência de um programa de melhoramento.
Os marcadores moleculares são amplamente utilizados para estudo populacional, mapeamento e análises de similaridade e ainda, distância genética. Além disso, é possível, com estes, identificarem acessos de plantas, isolados de um microrganismo ou até completar estudos de sistemática.
Marcadores moleculares, pelo fato de discriminarem a contribuição genética de cada genitor na sua descendência, podem ser utilizados para o controle da pureza genética de sementes híbridas ou de linha- gens, para a determinação da taxa de polini- zação cruzada em espécies autógamas e para a avaliação do tipo de ...
Os marcadores VNTR são analisados através da técnica RFLP (“restriction fragment lenght polymorphism”), a qual é baseada em mutações que alteram seqüências no DNA de um indivíduo, de modo que enzimas de restrição podem perder a capacidade de clivar aquele DNA em posições ainda susceptíveis à clivagem nos DNAs de outros ...
Base genética dos marcadores RFLP: O polimorfismo observado na técnica de RFLP ocorre porque o DNA de indivíduos geneticamente distinto difere na sequência de nucleotídeos ao longo da fita. ... A base genética do polimorfismo observado resulta de mutações nos sítios de restrição, deleções e rearranjos entre os sítios.
O procedimento de PCR envolve três etapas, cada uma repetida muitas vezes.
Seu princípio se baseia na duplicação de cadeias de DNA “in vitro” que pode ser repetida diversas vezes, gerando quantidade de DNA suficiente para realizar diversas análises. Com apenas um único fragmento de DNA é possível reproduzir milhões de cópias.
PCR Convencional Consiste na replicação de sequências específicas de DNA utilizando equipamentos termocicladores. Para realizar a reação acrescentam-se às amostras de material genético sequências iniciadoras complementares (também conhecidas como primers), desoxirribonucleotídeos e DNA-polimerase termo resistente.
Nested PCR: Para melhorar a especificidade e a eficiência da reação, o segmento genômico é amplificado primeiro de forma abrangente, copiando até mesmo seqüências localizadas fora dela, e depois, utilizando este primeiro produto, a amplificação da real seqüência-alvo.
Uma variação da PCR, conhecida como nested PCR (nPCR), utiliza dois conjuntos de oligonucleotídeos iniciadores em reações subsequentes, cujo produto de amplificação da primeira reação é utilizado como molde para a segunda.
A PCR, que significa reação em cadeia da polimerase (do inglês polymerase chain reaction), é uma técnica da biologia molecular para amplificar uma única ou poucas cópias de um pedaço de DNA e baseia-se no processo de replicação do DNA que ocorre in vivo.
PCR MULTIPLEX A técnica de multiplex foi desenvolvida com a finalidade de promover a diferenciação entre várias espécies ou gêneros microbianos simultaneamente, considerando ser este um teste único e altamente específico (OLIVEIRA et al., 2007).
A Reação em Cadeia da Polimerase – PCR – tem sido uma ferramenta aliada a medicina na pesquisa, diagnóstico e monitoramento de diferentes tipos de doenças. Também, é uma ferramenta utilizada para a determinação de características genéticas individuais e em análises forenses.
A reação de PCR é ativada quando a temperatura atinge 960C. Esse procedimento aumenta a especificidade da PCR, pois a DNA polimerase contém um anticorpo, que se desnatura e ativa a enzima ao atingir esta temperatura.
Manter os reagentes no gelo durante todo o experimento. Reagentes PCR padrão incluem umaconjunto de iniciadores apropriados para o gene alvo desejado ou segmento de DNA a ser amplificada, a polimerase do ADN, um tampão para a polimerase de ADN específico, desoxinucleótidos (dNTPs), molde de ADN, e água estéril.
Os primers de PCR são pedaços curtos de DNA de fita simples, onde dois primers são usados para cada reação de PCR, e eles são projetados de modo que englobem a região de interesse (região para ser copiada), ligando as fitas opostas do DNA molde, bem nas extremidades da região a ser copiada.
O primer inicia a síntese de DNA, isto é, faz com que ela comece. Uma vez que o primer de RNA está em seu lugar, a DNA polimerase o "amplia", adicionando nucleotídeos um por um para fazer uma nova fita de DNA que é complementar à fita molde.
Primase é uma enzima RNA polimerase que atua na replicação de DNA. ... Essa sequência de RNA, também conhecida como primer, é importante porque a DNA polimerase só pode sintetizar uma fita de DNA a partir de uma sequência preexistente de nucleotídeos.
BLAST nucleotideo (BLASTn) O programa blastn é usado para fazer buscas e alinhamentos de segmentos de DNA mais gerais, usando regiões de genomas onde encontramos misturas de regiões codificantes e não codificantes, comparaçoes de rRNA, tRNA e mRNA.
Os fragmentos de DNA que compõem a fita de DNA com replicação descontínua são chamados de Fragmentos de OKazaki. NA polimerase especial, denominada de polimerase de reparo, faz a ligação entre os dessoxirribonucleotídeos complementares á região antes ocupada pelo primer.
São pequenos segmentos produzidos durante a duplicação da fita descontínua do DNA e que serão unidos ao final do processo . Após o desenrolamento do DNA, ocorre a ação de uma nova enzima a DNA polimerase, que age de 2 formas. ... Na fita líder ela age de maneira contínua e rápida.