Os protocolos para extração de DNA envolvem 3 etapas básicas: lise das membranas, limpeza de contaminantes (proteínas e outras macromoléculas) e a precipitação do DNA. Nesse video o DNA de Drosophila é extraído pontuando essas 3 etapas.
Extraindo o DNA:
A extração de DNA inclui basicamente dois procedimentos principais: a lise das células presentes na amostra e a purificação do DNA. Após a lise das células, o DNA deve ser separado dos restos celulares e das proteínas, precipitado e suspenso em volume adequado de água ultrapura ou soluções-tampão adequadas.
Extração de RNA
A bancada deve ser constantemente limpa com SDS 10% e com etanol 70% e, se possível, exclusiva para a manipulação de RNA. E, principalmente, devem ser tomados cuidados com as luvas utilizadas, de forma a mantê-las livres das RNAses, normalmente liberadas abundantemente pelas secreções da pele.
Muitos testes genéticos envolvidos em estudos de doenças humanas necessitam da utilização do DNA genômico extraído de amostras de sangue. Normalmente, o DNA genômico é obtido a partir da separação da camada de células brancas (buffy-coat) ou do sangue total.
Dissolva o DNA isolado em 1,0 ml de tampão TE (Tris-HCl 10 mM, pH 8,0; EDTA 1 mM) e adicione 500 µl de acetato de amônio a 7,5 M. 2. Feche o tubo e misture suave- mente por inversão para homogenei- zar a solução. Incube no gelo por 15 minutos.
Sabe-se que a maior parte do DNA dos eucariotes está presente no núcleo das células e, em menor quantidade, em organelas como as mitocôndrias e os cloroplastos.
Você aprendeu lá nas aulas de biologia: o DNA, que armazena todas as informações biológicas do organismo, tem o formato de dupla hélice. ... Mas, ver mesmo a dupla hélice, ninguém tinha visto. Até agora. Pela primeira vez, cientistas conseguiram capturar uma imagem real do DNA usando um microscópio eletrônico.
Coloque a cebola picada no copo com a solução detergente/sal e leve ao banho-maria por 15 minutos. -Retire o copo do banho-maria e resfrie-o rapidamente, colocando-o na bacia com gelo durante 5 minutos. -Coe a mistura no coador de papel, recolhendo o filtrado em um copo limpo.
Mergulhe o bastão ou palito dentro do tubo até o local onde se encontra a solução mais turva (o filtrado com moléculas de DNA); 7. Retire um pouco dos filamentos e coloque-os em uma lâmina, pingue uma gota da solução extratora, cubra com uma lamínula e em seguida observe ao microscópio.
Método (ou como fazer) Coloque um morango, previamente lavado e sem as sépalas (as folhinhas verdes) em um saco zip loc. Esmague o morango com o punho por, no mínimo, 2 minutos. Adicione a solução de extração ao conteúdo do saco. Misture tudo, apertando com as mãos, por 1 minuto.
O morango precisa ser macerado para que os produtos químicos utilizados para a extração cheguem mais facilmente em todas as suas células.
Utilização da Água morna: O aumento da temperatura promove uma maior agitação molecular, o que ajuda a desestabilizar as membranas lipídicas. Além disso, a alta temperatura inativa enzimas que podem degradar o DNA (DNAses).
A proteinase K é utilizada na desnaturação das proteínas do DNA, fazendo com que ele fica de maneira descompactada; a RNase é utilizada na quebra dos RNAs visto que o mesmo não é útil no processo.
A solução de lise é assim denominada devido a sua função de rompimento da membrana plasmática e outras membranas. O detergente permite a desestruturação das moléculas de lipídios das membranas biológicas.
O álcool gelado em solução salina proporciona uma solução heterogênea e faz com que as moléculas de DNA se aglutinem, formando a massa filamentosa e esbranquiçada.
A função do tampão de lise, além de destruir membranas plasmáticas, é manter o pH e quelar metais que, porventura, possam ativar endonucleases.
O DNA (Ácido Desoxirribonucleico) é uma molécula presente no núcleo das células dos seres vivos que carrega toda a informação genética de um organismo. ... Por esta razão, o DNA tem papel fundamental na hereditariedade, sendo considerado o portador da mensagem genética.