CROMATOGRAFIA: opera com o mesmo princípio da extração, porém uma fase é fixada no local, enquanto a outra fase se move por ela. Separação de misturas por interação diferencial dos seus componentes entre uma FASE ESTACIONÁRIA (líquido ou sólido) e uma FASE MÓVEL (líquido, gás ou fluído supercrítico).
A existência de um dos picos sobrepostos, com formato diferente dos demais, indica nitidamente a coeluição de um interferente que compartilha a mesma massa/carga ou a mesma transição.
Um parâmetro frequentemente usado em cromatografia é o "fator de retenção" de um composto, abreviado como Rf. Na cromatografia de camada fina, o Rf é função da fase estacionária usada e do eluente. Ele é definido como a razão entre a distância percorrida pela mancha do componente e a distância percorrida pelo eluente.
O cálculo do Rf é realizado medindo-se a distância que a substância se deslocou a partir do ponto em que foi aplicada (ds), a partir do centro de gravidade da mancha e divide-se pela distância percorrida pela massa de solvente a partir do ponto da amostra (dm).
Os diferentes compostos presentes nas amostras percorrem a placa de CCD de maneira diferentes, sendo possível a separação. A CCD pode ser usada para monitorar o progresso de uma reação química, identificar os compostos presentes numa mistura e determinar a pureza de uma substância.