Para converter um valor de porcentagem de transmitância (% T) em absorbância, use a seguinte equação: Absorbância = 2 - log (% T). Por exemplo, para converter 56% de T em absorbância, calcule 2 - log (56) = 0,252 unidades de absorbância.
Lei de Beer-Lambert Exercício 3: Qual o valor da absorbância correspondente à T = 45%? Se uma solução 0,01 mol/L exibe T = 45%, qual será a porcentagem de transmitância para uma solução, do mesmo composto, de concentração igual a 0,02 mol/L. Resp.: A = 0,346; %T = 20% 8.
A equação deve estar na forma y = mx + b. Portanto, se você subtrair o intercepto em y da absorvância e dividir pela inclinação, estará encontrando a concentração da sua amostra.
Seu cálculo é feito dividindo-se a quantidade de matéria ou substância (mol) pelo volume da solução, conforme a expressão matemática abaixo:
Cálculo da quantidade de proteína:
.::Como criar uma curva de calibração ABS no Excel::.
A maioria das aplicações da curva de calibração é que na prática, temos interesse em predizer o valor de (X) dado uma observação(Y), para ilustrarmos o problema observe a seguinte aplicação.
Vá para a guia “Inserir”. Navegue até o menu “Gráficos” e selecione a primeira opção no menu suspenso “Dispersão”. Um gráfico será exibido contendo os pontos de dados das duas colunas.
Faixa linear de trabalho (FLT) ou Faixa ótima de trabalho (FOT) ou Faixa dinâmica: Faixa de concentração que se estende de LQ até LRL. Método do padrão interno: Consiste em adicionar uma substância em quantidade constante a todas as amostras, aos brancos e aos padrões de calibração em uma análise.
Padrão interno: Adição de quantidade conhecida de elemento de referência nos padrões e na amostra. Os brancos indicam a interferência de outras espécies na amostra e os traços de analito encontrados nos reagentes usados na preservação, preparação e análise.
A linearidade refere-se à capacidade do método de gerar resultados linearmente proporcionais à concentração do analito, enquadrados em faixa analítica especificada.
Uma curva analítica, que nada mais é do que um modelo estatístico, é, então, utilizada para obter a concentração do analito de uma amostra (xprevisto) que produz uma resposta observada (yobservada).
A curva de calibração, por sua vez, corresponde à relação gráfica entre os valores de absorbância e os de concentração de uma determinada substância. Através do gráfico é possível verificar a linearidade da reação e calcular um fator de conversão de valores de absorbância em concentração.
Efeito Matriz é um estudo de seletividade que obje- tiva averiguar possíveis interferências causadas pelas subs- tâncias que compõem a matriz amostral gerando, basica- mente, fenômenos de diminuição ou ampliação do sinal instrumental ou resposta instrumental.
Método de Adição de Padrão Método usado quando é difícil ou impossível fazer uma cópia da matriz da amostra. Nesse caso, a amostra é “contaminada” com uma quantidade conhecida de solução padrão contendo o analito. ... Cada solução é então diluída para um volume fixo e então é medida a absorbância.
O branco mede a resposta instrumental do procedimento analítico para impurezas ou espécies interferentes nos reagentes. Os brancos indicam a interferência de outras espécies na amostra e os traços de analito encontrados nos reagentes usados na preservação, preparação e análise.
Calibração com padrão externo: - São selecionados vários padrões com concentrações conhecidas e são introduzidos no instrumento e feita a leitura. ... Calibração com padrão interno: Padrão interno: apresente propriedade físicas e químicas do analito, além de fornecer um sinal similar ao do analito pelo equipamento.
Alguns dos tipos de serviços de calibração realizados com mais frequência são:
Fator de calibração = Valor determinado pelo equipamento a partir de materiais calibradores e que servirá de base para cálculo dos resultados. Calibrador = Material que irá transferir exatidão ao método.
FALSA INDICAÇÃO DE PERDA DA CALIBRAÇÃO Armazenamento incorreto das amostras do Controle Qualidade. Reconstituição incorreta das amostras do Controle Qualidade. Contaminação das amostras do Controle Qualidade. Troca da amostra do Controle Qualidade.
Cores em espectrofotometria A cor de uma solução está relacionada ao comprimento de onda complementar ao apresentado. Portanto, uma solução aparece como branca porque transmite luzes de todas as cores. Quando absorve luzes de todas as cores, a solução é preta.
A Lei de Beer estabelece uma relação linear entre a absorbância e a concentração da amostra, sendo portanto, possível determinar a concentração de uma amostra através de sua curva de calibração (absorbância versus concentração). com a potência radiante transmitida na presença destas espécies.
Em um espectrofotômetro UV/VIS de feixe simples a luz passa pela amostra. Em um de feixe duplo a luz passa por um divisor de feixe o qual alternadamente direciona o feixe de luz para a amostra ou para uma cela de referência várias vezes por segundo.
Como o espectrofotômetro funciona? Uma amostra é colocada dentro do espectrofotômetro. Há uma fonte de luz e um dispositivo chamado monocromador divide a luz em cores, ou melhor, comprimentos de onda individuais. Uma fenda ajustável permite apenas um comprimento de onda específico através da solução de amostra.