Twilight Sparkle vivia em Canterlot até a Princesa Celestia envia-la para Ponyville. Acompanhada por Spike, Twilight checa as preparações da cidade para a Celebração do Solstício de Verão e fica amiga do resto das personagens principais. A celebração é interrompida quando Nightmare Moon, a inimiga de Celestia, retorna ao poder e ameaça trazer a noite eterna para Equestria. Twilight e suas amigas descobrem os Elementos da Harmonia e os usam para derrotar Nightmare Moon. A Princesa Celestia dá a Twilight permissão de ficar em Ponyville para estudar a Mágica da amizade.
Twilight Sparkle não está se sentindo ela mesma ultimamente. Mesmo assim é o cérebro da maioria das operações, essa princesa não deixara que nada atrapalhe o seu caminho. Mesmo que pra isso tenha que se transportar para outro universo pra reunir velhas amigas, expor a vilã mais temida de Canterlot High e unir as massas antes do Baile de Outono pra levar a coroa pra casa. Mas tudo isso é só um dia de trabalho pra Twilight Sparkle, e ela vai usar todas as habilidades que tem: sua determinação, seu charme e sua inteligência pra fazer o trabalho. Bom isso, e um pouco de mágica.
Twilight pilota um balão de ar quente roxo no tema de abertura e usa o mesmo balão para voar com suas amigas até Cloudsdale para a competição de Rainbow Dash em Arco-Íris Supersônico. Em Retorno à Harmonia – Parte 2, as pôneis o usam para voar com Fluttershy para capturar Rainbow Dash. O balão também é usado em outras ocasiões.
Nas primeiras três temporadas da série, Twilight possui uma coroa contendo o Elemento da Mágica. Ela a recebe em A Amizade é Mágica, Parte 2 quando ela derrota Nightmare Moon. A coroa é incrustada com safiras e possui uma estrela magenta semelhante a bela marca de Twilight.
Twilight tende a ser cética sobre fatos não provados, como a crença de suas amigas de que Zecora é uma feiticeira do mal em Rédea nas Fofocas e o "Sentido Pinkie" de Pinkie Pie em Sentido Pinkie.
Over the course of season one it seemed as though Twilights repertoire of magic was rather narrow, but as season two has progressed she has gained more and more magical power. She can perform time and space travel, force fields and the like.
[Gravity Manipulation] Capable of using a spell that changes her own gravity polarity. FIM
No entanto, Twilight pode perder o controle sob estresse. Em A Praga do Século, ela histericamente sugere construir uma cópia de Ponyville em menos de um minuto antes que a Princesa Celestia possa ver os estragos causados pela infestação de parasprite.
Twilight and Spike later elaborate on this in Boast Busters (S1E6), stating that most unicorns only possess a small amount of magic related to their unique talents:
Teleported four targets, including herself, out of a forest while sprinting.. FIM
Quando tudo parece perdido, Twilight percebe que suas amigas encarnam os próprios elementos. Quando ela descreve como cada amiga representava um elemento, as esferas quebradas se transformam em colares cravejado de pedras preciosas que se fixam em torno dos pescoços das pôneis. Twilight representa o elemento da "Mágica", que só aparece quando os outros cinco elementos estão presentes. Os Elementos, empunhados pelas amigas, criam uma explosão de magia que vence Nightmare Moon e a faz voltar à sua forma original de Princesa Luna. Além disso, a cauda de Rarity, que ela cortou durante a viagem, é restaurada pelos Elementos.
Rarity (originalmente Princesa Celestia) possui o elemento da generosidade. As amigas não conseguem atravessar um rio porque uma serpente do mar, que está triste por seu bigode ter sido arruinado, está agitando a água. Rarity simpatiza com ele e corta seu próprio rabo para reparar o bigode. Grato, a serpente do mar as ajudam a atravessar o rio.
Can manifest herself within a book for several minutes as an illustration. This illustration can communicate with the outside world. The spell was originally used to speed up the process of information gathering from a book. To quote Twilight "I've been studying a new studying technique...You'd be amazed what you can pick up when you're actually in a book." FIM
Rainbow Dash (antigamente Princesa Luna e mais tarde Princesa Celestia) possui o elemento da lealdade. As pôneis encontram uma ponte de corda quebrada que se estende por uma ravina. Rainbow Dash se oferece para amarrar a outra extremidade da ponte, mas é confrontada por um grupo de pôneis que se chamam Os Shadowbolts. Eles elogiam Rainbow Dash e a convidam a se juntar a eles como sua capitã, contanto que ela abandone seus amigos. Rainbow Dash recusa a oferta dos Shadowbolts e amarra a ponte, permitindo que as outras atravessem.
Twilight revela que a Princesa Cadance foi sua babá quando ela era uma potra. No final de Casamento em Canterlot – Parte 2, Twilight se torna a cunhada de Cadance quando ela se casa com Shining Armor. Twilight gosta de passar um tempo com a Cadance como visto em Três É Demais quando Cadance a visita.
Rainbow Dash (Dashie) é uma pônei pégaso azul celeste e de crinas arco-íris baseado no brinquedo Firefly da “G1” e compartilha seu nome com o pônei terrestre da “G3”.
Após isso, Twilight volta para Equestria, mas graças ao fato dela ter conseguido re-energizar o portal, ela pode voltar ao mundo humano quando ela quiser. Sunset também começa a relatar as suas lições sobre a amizade em seu velho diário para que Twilight os leia em Equestria.
Princesa Celestia é profundamente mágica, e alguns dizem que ela tem mais do que mil anos de idade. Com a ajuda de sua irmã, a Princesa Luna, ela torna-se a ascensão do sol e a lua e define cada dia.
A mãe de Twilight Sparkle se assemelha ao notável pônei G1 Twilight em My Little Pony Special, com seu estilo de crina similar ao de Twilight. O pai de Twilight Sparkle se assemelha ao pônei G1 chamado Nightlight.