O método de sequenciamento de Sanger Também chamado de método didesoxi ou método de terminação de cadeia. Nesse procedimento, uma molécula de DNA cuja sequência deve ser determinada é convertida em fitas simples que são utilizadas como molde para sintetizar uma série de fitas complementares.
O Sanger sequencia os fragmentos de DNA individualmente, enquanto o NGS é uma técnica de sequenciamento em larga escala, no qual milhões e até bilhões de fragmentos são sequenciados simultaneamente em uma única corrida.
As letras possíveis são A, C, G e T, representando os quatro nucleotídeos (subunidades) de uma cadeia de DNA – as bases adenina, citosina, guanina, timina, covalentemente ligadas a uma "coluna vertebral" de fósforo. ... Sequências de DNA também pode conter "ADN lixo".
O Sequenciamento de Nova Geração (Next Generation Sequencing – NGS), consiste em um exame que realiza o sequenciamento do genoma humano, sendo capaz de ler grandes fragmentos do DNA, permitindo a identificação de diversas doenças ou modificações genéticas.
Nos tópicos a seguir vamos explicar o que é cada tipo de NGS e para que cada um é indicado.
O sequenciamento genético é uma técnica que envolve processos bioquímicos que permitem identificar cada nucleotídeo (base) em uma cadeia de DNA, como uma leitura, letra a letra.
Assim, quando o objetivo é o sequenciamento de genomas, seja de organismos simples como bactérias ou organismos complexos como o homem, torna-se necessário: “picotar” o DNA em fragmentos menores, sequenciar os pedacinhos obtidos e depois sobrepô-los em busca do genoma completo.
A síntese das cadeias truncadas é conseguida pelo uso de ddNTPs (didesoxirribonucleosídeos trifosfatados), os quais, e ao contrário dos dNTPs (desoxirribonucleosídeos trifosfatados), não possuem o grupo 3'-OH.
No método Sanger de sequenciamento, o DNA alvo é copiado muitas vezes, produzindo fragmentos de comprimentos diferentes. Nucleotídeos “terminadores de cadeia” fluorescentes marcam os finais dos fragmentos e permitem que a sequência seja determinada.
é baseado na incorporação de didesoxinucleotídeos que, ao serem incorporados, impedem a adição de nucleotídeos adicionais. depende do preparo de géis de acrilamida para separar os diferentes fragmentos de DNA que serão analisados.
na biblioteca genómica pretende-se que os genes estejam representados na mesma proporção em que existem no organismo; na de cDNA (obtido por cópia do mRNA), apenas estão presentes os genes que estão a ser expressos em determinado momento, na proporção dessa expressão.
Parcele no Cartão de Crédito