O Que Hematoxilina E Eosina?
Desde o 1º período da faculdade de Medicina, você se depara com o laboratório de microscopia. Isso ocorre na disciplina de histologia, em que todos os tecidos do nosso organismo podem ser observados no microscópio, sendo possível observar as células e como o tecido é estruturado, ou na disciplina de microbiologia, na qual estudamos diversos microrganismos e os observamos como bactérias, por exemplo.
Una vez seleccionados los componentes de tinción, se recomienda comenzar con el protocolo inicial. A partir de ahí, se varía la hematoxilina en incrementos de 30 segundos o la eosina en incrementos de 15 segundos. Recuerde que la eosina tiende a penetrar mucho más rápido. A menos que sea necesario aclarar u oscurecer significativamente la intensidad de la tinción con eosina, los incrementos más cortos son los más convenientes. También es importante que solo se cambie una tinción cada vez. Puede parecer que la hematoxilina manifieste una tinción excesiva, cuando en realidad es la eosina la que debe ser más intensa.
Referencias
Uma dessas colorações, muito conhecida por sinal, é a coloração de hematoxilina-eosina (HE), você já deve ter ouvido falar. Essa coloração é muito utilizada na histologia para corar diversos tecidos do nosso organismo. Provavelmente foi a primeira coloração que você viu. “Mas como é realizada, e por que recebe tal nome?”. Isso é de grande importância para entender o que significa cada cor presente na lâmina.
Sabemos que una talla no sirve para todos. Nuestra amplia gama de procesadores de tejidos le permite elegir el instrumento adecuado para las necesidades de espacio, rendimiento y flujo de trabajo de su laboratorio.
Los reactivos que confieren coloración azul, como el agua corriente de Scott, se utilizan para cambiar la hematoxilina del rojo al color azul tradicional que esperamos. Estas soluciones ligeramente básicas alteran químicamente el colorante para producir este cambio de color. En algunos lugares, el agua del grifo contiene minerales en tales cantidades que el pH hace que el agua sea lo suficientemente básica como para permitir la tinción de color azul de los núcleos sin necesidad de un reactivo específico para el azulado. Sin embargo, en la mayoría de los casos, los laboratorios normalmente añaden este paso para garantizar un azulado adecuado.
Coloração de Giemsa
Tras la preparación de una sección de parafina, todos los elementos se infiltran y rodean con cera de parafina, que es hidrófoba e impermeable a los reactivos acuosos. La mayoría de los componentes celulares y tisulares no tienen color natural y no son visibles. El primer paso para realizar una tinción H&E es disolver toda la cera con xileno (un disolvente hidrocarbonado).
Después de aclarar en agua del grifo, la sección se vuelve azul mediante el tratamiento con una solución débilmente alcalina. Este paso tiñe la hematoxilina de un color azul oscuro. Ahora se puede enjuagar y comprobar la sección para ver si los núcleos están correctamente teñidos y muestran el contraste adecuado y para evaluar el nivel de tinción de fondo.
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Como o nome “tricrômio” sugere, utilizam-se três cores, que vão diferenciar diferentes estruturas. Mas o principal destaque dessa técnica são as fibras de colágeno do tipo I, facilitando a sua observação. Nessa técnica, as fibras colágenas assumem a coloração verde. Além disso, permitem observar o núcleo e o citoplasma das células muito bem.
Já os basófilos possuem o núcleo azul escuro, mas sua grande peculiaridade são seus grânulos, que são volumosos, corados também em azul escuro, ocupando todo o citoplasma, e podendo se sobrepor ao núcleo.
Hematoxilina-eosina, H&E ou HE
As fibras reticulares são formadas por colágeno do tipo III, e ricas em glicoproteínas e proteoglicanos, que formam as redes. Estão presentes em órgãos como fígado, medula óssea, baço, linfonodos, e formam um arcabouço, uma rede de sustentação. E é assim que elas são vistas no microscópio.
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Cuando se cortan muestras de tejido y se colocan en un portaobjetos para que un patólogo las examine bajo el microscopio, el tejido es tan delgado que es casi invisible. Para que su patólogo pueda ver el tejido, es necesario teñirlo con un tinte para darle color.
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Una acidez leve es fundamental para la vida útil de la hematoxilina. Sin ella, la alcalinidad del aclarado con agua del grifo elevará el pH, lo que hará que el lago de tinte pueda precipitarse y que el color cambie de rojo cereza a rojo púrpura. La adición periódica de pequeñas cantidades de ácido acético a la hematoxilina ayudará a mantener un pH adecuado y puede prolongar la vida útil de la tinción.
A veces se utilizan otras mezclas de eosina, como EA50 y EA65. Estas tinciones se utilizan principalmente para citología y, además de la eosina Y, incluyen el verde claro, el amarillento y el marrón Bismarck. La adición de estos dos tintes proporciona las variaciones de color del citoplasma azul pálido al rosa, que se aprecia mejor en las células escamosas de una citología vaginal. La concentración de la mezcla determina la designación de 50 o 65.
Las hematoxilinas que utilizan sales de hierro como mordiente se utilizan normalmente en tinciones especiales. Esto se debe a que pueden mostrar más estructuras tisulares que las hematoxilinas alumínicas, como las fibras de mielina y elastina. Uno de las más conocidas es la de Weigert, que se utiliza en la tinción Verhoff-Van Gieson, que se muestra en la imagen.
Coloração Gram
La hematoxilina de Harris es otra hematoxilina alumínica de uso frecuente que puede utilizarse para la tinción progresiva de muestras citológicas, pero también para la tinción progresiva o regresiva en histología. La tinción tiende a proporcionar detalles nucleares claros. Uno de los retos al utilizar Harris es que se diferencia mejor con un ácido suave, en lugar de los diferenciadores a base de ácido clorhídrico más utilizados. Harris es una tinción a base de alcohol. La hematoxilina de Gill es una hematoxilina alumínica. Puede utilizarse como tinción progresiva o regresiva y está disponible en diferentes concentraciones. Debido a que se fabrica con agua y etilenglicol, la autooxidación de la tinción se evita normalmente durante meses, lo que la hace más estable que la hematoxilina de Harris. Sin embargo, la naturaleza de la de Gills hace que pueda producirse tinción extranuclear. La mucina e incluso los adhesivos utilizados en la preparación pueden contaminarse con Gills.
Es importante lograr el equilibrio adecuado de los tintes. Una tinción excesiva con hematoxilina puede crear la ilusión de eosina insuficientemente teñida, al igual que la una tinción excesiva con eosina puede hacer que la hematoxilina parezca más clara de lo que realmente es. Por lo tanto, al optimizar la tinción, asegúrese de editar solo la hora de uno de los componentes. Esta técnica ayudará a eliminar la necesidad de dedicar tiempo adicional a ajustar la tinción.
Hay una serie de diferentes formulaciones de hematoxilina y eosina de uso popular, cada una con varias ventajas y desventajas. Algunos laboratorios prefieren preparar sus propias soluciones, mientras que otros eligen productos comerciales listos para usar.
Índice
La eosina Y es la forma de eosina más utilizada y puede utilizarse tanto en agua como en alcohol. La adición de una pequeña cantidad de ácido acético definirá aún más la tinción de la eosina. La eosina con floxina añadida realzará los rojos observados con la tinción con H&E. Por lo tanto, para aquellos que quieran ver rojos más intensos, se puede añadir floxina.
Tanto si se trata de un diagnóstico clínico como del próximo avance en investigación, cada momento es importante. Hay una presión constante para producir rápidamente resultados fiables. Afronte el reto con soluciones diseñadas para satisfacer las necesidades de hoy y las oportunidades de mañana.
La hematoxilina se utiliza para ilustrar los detalles nucleares en las células. La profundidad de la coloración no solo está relacionada con la cantidad de ADN en los núcleos, sino también con el tiempo durante el que la muestra se deje en hematoxilina.
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No entanto, para que tudo isso seja possível, as lâminas para observação precisam ser preparadas, passando por várias etapas. Uma dessas etapas é a coloração, ou seja, esses tecidos e microrganismos são corados para que consigamos vê-los na microscopia óptica.
Além de corar as células sanguíneas, permitindo-nos observar todas essas características morfológicas, a técnica de Giemsa também cora alguns parasitas, como é o caso do Plasmodium (causador da Malária) e do Trypanosoma cruzi (agente causador da doença de Chagas).
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