A eletroforese em gel é uma técnica de separação de moléculas que envolve a migração de partículas em um determinado gel durante a aplicação de uma diferença de potencial. ... A eletroforese normalmente é utilizada para separar proteínas e moléculas de DNA e RNA.
Como interpretar os resultados. De acordo com o padrão de bandas apresentado, é possível identificar o tipo de hemoglobina do paciente. A hemoglobina A1 (HbA1) apresenta maior peso molecular, não sendo notada tanta migração, enquanto que a HbA2 é mais leve, ficando mais ao fundo do gel.
As moléculas de DNA previamente amplificadas em outras reações (amplicons) são as que representam as maiores ameaças de contaminação. Por esse motivo, é imprescindível adotar práticas que assegurem sua eficiência e confiabilidade dos resultados, principalmente quando empregada para fins de diagnóstico.
Como diluente, utilize água ultra pura de PCR (livre de DNase e RNase) para reconstituir e diluir seus primers. Além disso, ponteiras com filtro também são importantes para evitar contaminação durante o processo de pipetagem.
Diluição: “1 parte de primer” para “80 a 100% partes de thinner para laca nitrocelulose”
Diluição do dNTP O frasco original contém 250 l de cada dNTP a 100 mM. Então, toma-se 10 l de cada base dNTP, adiciona-se 360 l de água Mili Q = 400 l. Distribuímos em alíquotas de 50 a 100 l. Tampão: vem concentrado 10 X.