O sistema necessita de duas sondas homólogas a porções adjacentes em uma das fitas do DNA amplificado. Essas extremidades adjacentes são capazes de emitir fluorescência; assim, cada sonda pode ser chamada de fluorocromo.
Antes do desenvolvimento da PCR , Reação em Cadeia da Polimerase, os métodos utilizados para amplificar e gerar cópias de fragmentos de DNA eram demorados e trabalhosos. A PCR permite realizar várias cópias de um segmento específico de DNA com rapidez e precisão em um tempo muito menor.
PCR Convencional Consiste na replicação de sequências específicas de DNA utilizando equipamentos termocicladores. Para realizar a reação acrescentam-se às amostras de material genético sequências iniciadoras complementares (também conhecidas como primers), desoxirribonucleotídeos e DNA-polimerase termo resistente.
A Taq polimerase suporta as elevadas temperaturas usadas em PCR, tendo uma semi-vida enzimática de 40 minutos (a 94°C). ... Este tipo de atividade enzimática permite a outras polimerases corrigir a introdução de um nucleótido errado na cadeia de DNA nascente.
Multiplicação ou expressão do gene As bactérias servem como “mini fábricas”, produzindo grandes quantidades de proteína. Por exemplo, se nosso plasmídeo continha o gene da insulina humana, as bactérias começariam a transcrição do gene e a tradução do RNAm para produzir muitas moléculas da proteína insulina.